流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)：細(xì)胞周期與凋亡流式術(shù)

更新時(shí)間：2025-08-13 | 點(diǎn)擊率：265

　　流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)（Flow Cytometry，簡(jiǎn)稱FCM）在細(xì)胞生物學(xué)研究中具有重要地位，特別是在細(xì)胞周期與凋亡的檢測(cè)方面。以下是對(duì)流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)在細(xì)胞周期與凋亡應(yīng)用方面的詳細(xì)闡述：

　　一、流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)概述

　　流式細(xì)胞術(shù)是一種高效的用于單細(xì)胞分析/分選的生物學(xué)技術(shù)，它利用流式細(xì)胞儀對(duì)處于快速直線流動(dòng)狀態(tài)中的單列細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行逐個(gè)、多參數(shù)、快速的定性、定量分析或分選。通過(guò)特定的熒光標(biāo)記抗體或染料對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，流式細(xì)胞儀可以檢測(cè)細(xì)胞表面的標(biāo)記物、細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、DNA含量等，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞性質(zhì)的區(qū)分和分析。

　　二、流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)在細(xì)胞周期中的應(yīng)用

　　細(xì)胞周期是指細(xì)胞從一次分裂完成開(kāi)始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全過(guò)程。在真核生物中，細(xì)胞周期分為處于阻留狀態(tài)的G0期、分裂間期、分裂期（M期），其中分裂間期又分為DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）與DNA合成后期（G2期）。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期的原理主要是基于細(xì)胞DNA含量的變化。在細(xì)胞周期的不同階段，DNA含量存在差異，因此可以通過(guò)DNA染料（如碘化丙啶PI）對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，并通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度來(lái)判斷細(xì)胞所處的周期階段。

　　流式細(xì)胞術(shù)在細(xì)胞周期檢測(cè)中的應(yīng)用包括：

　　1.鑒定G0/G1期、S期、G2/M期細(xì)胞比例，為臨床診療提供量化依據(jù)。

　　2.評(píng)估腫瘤細(xì)胞增殖活性，輔助判斷化療敏感性。例如，急性白血病患者骨髓細(xì)胞S期比例超過(guò)20%提示預(yù)后不良；實(shí)體瘤組織檢測(cè)中G2/M期細(xì)胞增多可能與放射治療抵抗相關(guān)。

　　三、流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)在細(xì)胞凋亡中的應(yīng)用

　　細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的一種程序性死亡，是生物體中普遍存在的現(xiàn)象。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡的原理主要是基于細(xì)胞形態(tài)的變化、細(xì)胞表面磷脂酰絲氨酸（PS）的外翻、線粒體跨膜電位的塌陷、DNA片段化等特征。其中，膜聯(lián)蛋白V（Annexin V）與碘化丙啶（PI）聯(lián)合使用是檢測(cè)細(xì)胞凋亡的常用方法。

　　Annexin V是一種Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能夠高親和力地結(jié)合到PS上。由于凋亡早期細(xì)胞的PS外翻，因此Annexin V可以與這些細(xì)胞結(jié)合。而PI是一種熒光核酸染料，由于分子較大無(wú)法穿透活細(xì)胞的完整細(xì)胞膜，因此只能進(jìn)入膜完整性受損的細(xì)胞（如凋亡中晚期和壞死細(xì)胞）。通過(guò)Annexin V與PI的聯(lián)合染色，可以在流式細(xì)胞儀上區(qū)分活細(xì)胞、早期凋亡細(xì)胞、中晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞。

　　流式細(xì)胞術(shù)在細(xì)胞凋亡檢測(cè)中的應(yīng)用包括：

　　1.鑒定凋亡細(xì)胞并區(qū)分細(xì)胞凋亡和壞死。

　　2.評(píng)估藥物或輻射等處理對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。

　　四、流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)勢(shì)與注意事項(xiàng)

　　流式細(xì)胞術(shù)在細(xì)胞周期與凋亡檢測(cè)中的優(yōu)勢(shì)包括：

　　1.快速、準(zhǔn)確：能夠在短時(shí)間內(nèi)對(duì)大量細(xì)胞進(jìn)行多參數(shù)測(cè)量。

　　2.多參數(shù)分析：可以同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞表面的標(biāo)記物、細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、DNA含量等。

　　3.高靈敏度：能夠檢測(cè)到微量的細(xì)胞變化。

　　然而，在使用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)也需要注意以下事項(xiàng)：

　　1.樣本新鮮度：離體后六小時(shí)內(nèi)完成處理可避免細(xì)胞降解。

　　2.操作規(guī)范：需設(shè)置同型對(duì)照排除非特異性染色，采用合適的內(nèi)參校準(zhǔn)儀器。

　　3.結(jié)果解讀：需要結(jié)合病理形態(tài)學(xué)和免疫分型綜合判斷，避免單一指標(biāo)誤診。